Ideonella dechloratans är en av flera isolerade bakteriestammar med förmågan att använda klorat i sin metabolism i anaerob miljö. Detta kan utnyttjas inom exempelvis pappersindustrin där klorat är en miljöfarlig restprodukt efter klordioxidblekning.   Klorat och perklorat har visat sig ha negativa effekter hos både människor, djur och växter vilket ger ett stort behov av mer forskning på förbättrade reningsmetoder. Kan genregleringen av enzymerna som sköter nedbrytningen av klorat, kloratreduktas och kloritdismutas, förbättras genom att exempelvis fungera även i aerob miljö så skulle reningen förbättras samt kostnader dras ner.   Genom att införa promotorregionerna för kloratreduktas och kloritdismutas i en broad-host-range reporterplasmid, pQlacZ-1, så kan dessa testas i flera olika förhållanden och i olika typer av gramnegativa bakterier.   Genom dubbelklyvning av pQlacZ-1 med BamHI och EcoRI så har PCR produkter av Clrp och Cldp från Ideonella dechloratans kunnat ligeras in för att sedan transformeras in i E. coli, XL-1 Blue.    Gelextraktion har visat sig vara den effektivaste reningsmetoden inför ligering men utförligare screening behöver göras på transformanterna för att säkerställa metodens effektivitet..

De flesta klorater som finns i naturen kommer från utsläpp av människan i flera storaindustrier. Kloraterna påverkar flera olika levande organismer och det är därför viktigt att tahand om dem efter utsläppen. Flera olika bakterier kan bryta ned klorat till klorid och syre, enav dessa är Ideonella dechloratans. Nedbrytningen sker med de alkaliska enzymernakloratreduktas och kloritdismutas under anaeroba förhållanden. I detta arbete har 2Dgelelektrofores utvecklats för alkaliska proteiner i Ideonella dechloratans i syfte att kunnajämföra proteinuttryck under olika odlingsförhållanden.

Abstract:In previous experiments with the bacterium Ideonella dechloratans a probable sequencecoding for a cytochrome c protein (cyt c) was observed, the sequence is assumed to have afunction in the bacterial respiratory chain. Detection attempts have been made to try to findthis protein, but have not succeeded. The purpose of this project is to detect the expressionof mRNA associated with the cytochrome c. And if it is detected, it will also be investigated ifthere is any difference in expression of the mRNA due to aerobic or anaerobic environment.Total RNA was purified from cultures grown under aerobic and anaerobic conditions. cDNAwas then synthesized using reverse transcriptase and subsequently amplified with thespecific primers in a qRT-PCR.qRT-PCR testing showed a distinct amplification of primer product, confirming that I.dechloratans expresses mRNA coding for the cyt c protein.

   Syftet med detta projekt var att konstruera en mindre variant av pQlacZ-1 för att senare kunna använda den som reportervektor i Ideonella dechloratans. pQlacZ-1 är en plasmid som är 17,1 kbp stor, som skulle kunna användas som reportervektor i  Ideonella dechloratans för att kunna undersöka olika promotorsekvenser. Detta är möjligt eftersom pQlacZ-1 är en broad host range plasmid och saknar promotorsekvensen för lacZ genen. Ett problem med pQlacZ-1 är dess storlek vilket gör den svår att transformera, och då speciellt i Ideonella dechloratans som är svår att transformera överhuvudtaget. En stor del av projektet har lagts på att ta reda på hur pQlacZ-1 ser ut i detalj, då detta inte finns väl beskrivet.

Arbetet beskriver en analys av innehållet av membranbundna och periplasmiska c-cytokromer hos perkloratodlade GR-1 och jämförelser med c-cytokrominnehållet hos Ideonella dechloratans och andra kända c-cytokromer, samt med genomet för Dechloromonas aromatica. Den jämförande studien av c-cytokromer gjordes med syftet att undersöka en hypotes om att bakterierna använder olika vägar för elektronöverföring till det periplasmiska enzymet (per)kloratreduktas. Cellmembran från GR-1 renframställdes genom ultracentrifugering och periplasma preparerades fram med hjälp av osmotisk chock. Fraktionerna analyserades sedan med SDS-PAGE och peptider med kovalent bundet hem (c-cytokromer) detekterades med hjälp av en specifik färgreaktion. Även Touchdown PCR med degenererade primrar genomfördes på isolerat DNA från GR-1 i ett försök att finna en gen kodande för ett NapC/NirT-liknande protein.

Perchlorate and chlorate are naturally occurring in the atmosphere, from here it sediments into groundwater and soil. The pollution is increased by discharges of perchlorate and chlorate from agriculture and paper mills. Bacteria capable of reducing perchlorate and chlorate to chloride and oxygen can be used to get rid of these contaminants. However an anaerobic environment needs to be sustained in order for this reaction to be used. For this reduction to work in an aerobic environment as well, a greater knowledge of the reducing enzymes, regulating factors and their corresponding genes is needed.

Syftet med arbetet var att utveckla en metod för att rena fram cytokrom c-Id1 ur periplasma från Ideonella dechloratans. Inledningsvis undersöktes proteinets stabilitet vid låga pH. Flera olika kromatografiska metoder provades under arbetets gång. Till de inledande experimenten användes flow-through fraktioner från rening av annat protein som startmaterial. Senare försök gjordes på periplasma från I.

Oxochlorates are anions with a partially naturally occurrence in nature but are also spread by human activities, including the paper industry. These compounds are harmful to both nature and humans, which makes it necessary to find a good way for their degradation. There are two different kinds of bacteria that can use oxochlorates as electron acceptors in their metabolism, bacteria that break down perchlorate and bacteria that break down both perchlorate and chlorate. A bacterium that can break down chlorate under anaerobic conditions is Ideonella dechloratans which holds the genes for chlorite dismutase and chlorate reductase which are enzymes for the degradation of chlorate. Gene expression and enzyme activity of chlorite dismutase are induced under anaerobic conditions, which makes it interesting to find out how this regulation functions in order to better exploit these bacteria in biological wastewater treatment.

Syftet med studien är att studera lärarens intentioner och hur elever uppfattar lärarens budskap inom kemi på gymnasieskolan. Metoden jag använt mig av är Stimulated Recall. Genom att jag observerat och filmat lektionerna, där jag har träffat lärare och elever var för sig för att reflektera över lektionstillfället. De reflektionsfrågor jag använt mig av är mallen för en så kallad CoRe, som Berry, Loughran & Mulhall (2003) från Australien har utformat. Det är ett reflektionsverktyg men även ett sätt för att exemplifiera PCK (pedagogical content knowledge).

Syftet med arbetet var att utveckla en metod för att rena fram cytokrom c-Id1 ur periplasma från Ideonella dechloratans. Inledningsvis undersöktes proteinets stabilitet vid låga pH. Flera olika kromatografiska metoder provades under arbetets gång. Till de inledande experimenten användes flow-through fraktioner från rening av annat protein som startmaterial. Senare försök gjordes på periplasma från I.

Syftet med arbetet var att utveckla en metod för att rena fram cytokrom c-Id1 ur periplasma från Ideonella dechloratans. Inledningsvis undersöktes proteinets stabilitet vid låga pH. Flera olika kromatografiska metoder provades under arbetets gång. Till de inledande experimenten användes flow-through fraktioner från rening av annat protein som startmaterial. Senare försök gjordes på periplasma från I.

Syftet med arbetet var att utveckla en metod för att rena fram cytokrom c-Id1 ur periplasma från Ideonella dechloratans. Inledningsvis undersöktes proteinets stabilitet vid låga pH. Flera olika kromatografiska metoder provades under arbetets gång. Till de inledande experimenten användes flow-through fraktioner från rening av annat protein som startmaterial. Senare försök gjordes på periplasma från I.